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產(chǎn)品型號(hào):
廠(chǎng)商性質(zhì):生產(chǎn)廠(chǎng)家
訪(fǎng)問(wèn)量:949
更新時(shí)間:2022-09-28
簡(jiǎn)要描述:
設(shè)置基線(xiàn)(baseline):一般情況下,對(duì)ABI 7500、7700等儀器設(shè)為6-15cycle,對(duì)PE5700設(shè)為3-15cycle,對(duì)MJ Research Option2設(shè)為6-12cycle。特殊情況可對(duì)基線(xiàn)適當(dāng)調(diào)整。設(shè)置閾值(threshold):以閾值線(xiàn)剛超過(guò)陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線(xiàn)(無(wú)規(guī)則的噪音線(xiàn))的至高點(diǎn)。結(jié)果判斷
產(chǎn)品名稱(chēng):豬偽狂犬病病毒野毒株檢測(cè)試劑盒
規(guī) 格: 50T
檢測(cè)方法: 實(shí)時(shí)熒光 PCR
保存方式: 2~8℃
有 效 期: 1年
產(chǎn) 地: 中國(guó)
用 途: 僅用于科研實(shí)驗(yàn)
訂購(gòu)流程:豬偽狂犬病病毒野毒株檢測(cè)試劑盒
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1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1 樣本前處理
組織:取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿,勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中;
液體標(biāo)本:取適量標(biāo)本13000rpm離心2min,棄上清。
1.2 DNA提取
1) 對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入40ul 核酸提取液,100℃恒溫處理10分鐘,13,000 rpm離心5分鐘,取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml EP管,-20℃保存;
2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
根據(jù)代檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1
管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),體系配制如下表:
試劑
WSSV 反應(yīng)液
酶液
用量(樣本數(shù)為N)
20μl
1μl
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟1提取的DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μl,加入相應(yīng)的
反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi);
5. 結(jié)果分析判定
結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置基線(xiàn)(baseline):一般情況下,對(duì)ABI 7500、7700等儀器設(shè)為6-15cycle,對(duì)PE5700設(shè)為3-15cycle,對(duì)MJ Research Option2設(shè)為6-12cycle。特殊情況可對(duì)基線(xiàn)適當(dāng)調(diào)整。
設(shè)置閾值(threshold):以閾值線(xiàn)剛超過(guò)陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線(xiàn)(無(wú)規(guī)則的噪音線(xiàn))的至高點(diǎn)。
結(jié)果判斷
陽(yáng)性:檢測(cè)樣本Ct值小于等于35.0,且曲線(xiàn)有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)期;
可疑:檢測(cè)樣本Ct值大于35.0且小于40.0,重復(fù)一次實(shí)驗(yàn),如果Ct值仍小于40.0,且曲線(xiàn)有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)期,為陽(yáng)性,否則為陰性;
陰性:檢測(cè)不到樣本Ct值或Ct值為40。
6. 對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的解析
實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染,試劑污染,標(biāo)本交叉污染會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果。
7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線(xiàn)無(wú)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期或無(wú)Ct值顯示;
陽(yáng)性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線(xiàn)有明顯對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,且Ct值≤32;
以上條件應(yīng)同時(shí)滿(mǎn)足,否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。
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