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高致病性豬藍(lán)耳病病毒檢測(cè)試劑盒(熒光PCR)

產(chǎn)品型號(hào):

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

訪問(wèn)量:1560

更新時(shí)間:2022-09-15

簡(jiǎn)要描述:

高致病性豬藍(lán)耳病病毒檢測(cè)試劑盒

高致病性豬藍(lán)耳病病毒檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)規(guī)格:50T/盒

配件
高致病性豬藍(lán)耳病病毒檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)的組成

詳細(xì)說(shuō)明:

高致病性豬藍(lán)耳病病毒檢測(cè)試劑盒

高致病性豬藍(lán)耳病病毒檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)規(guī)格:50T/盒

配件
高致病性豬藍(lán)耳病病毒檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)的組成


2. 標(biāo)本采集,方法如下:
注:陰性對(duì)照為基因組DNA,陽(yáng)性對(duì)照為失去活性的病毒cDNA。
儲(chǔ)存方式
避光-20℃以下保存,避免反復(fù)凍融,有效期12個(gè)月。
【適用儀器 】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。
標(biāo)本要求
1. 適用標(biāo)本類型:發(fā)病動(dòng)物血液、空腸及小腸腸內(nèi)容物及組織臟器(腸道組織、腸系膜及淋巴結(jié)等)和病毒培養(yǎng)液。

(1) 血清:用一次性注射器取靜脈血2-3ml,轉(zhuǎn)至5ml 的干燥管中,密閉送檢。

(2) 腸內(nèi)容物:無(wú)菌條件下取腸道內(nèi)容物約1g 左右,置入1ml 含有1.0ml PBS(或生理鹽水)的5ml 離心管中,立即送檢。

(3) 組織臟器:取發(fā)病動(dòng)物腸道組織及腸系膜淋巴結(jié)等組織約1g,置一1.5ml的潔凈離心管中,密閉送檢。

3.應(yīng)避免標(biāo)本間交叉污染。

4.標(biāo)本收集后可立即檢測(cè);若不能立即檢測(cè),可置于2~8℃冷藏過(guò)夜保存;如需長(zhǎng)期保存,標(biāo)本應(yīng)凍存于-80℃以下,避免反復(fù)凍融。

【檢驗(yàn)方法】高致病性豬藍(lán)耳病病毒檢測(cè)試劑盒

1. 試劑準(zhǔn)備(試劑準(zhǔn)備區(qū))

(1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實(shí)驗(yàn)所需試劑,充分融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著液體。

(2)核算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的反應(yīng)數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的各種試劑量。

n =陰性對(duì)照數(shù)(1T)+陽(yáng)性對(duì)照數(shù)(1T)+誤差預(yù)留量(1T)+樣本數(shù)

單反液配制表(每份)

RT-PCR反應(yīng)液

15.0 μL

逆轉(zhuǎn)錄酶

2.0 μL

Taq酶

3.0 μL

(3)在無(wú)菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。

2.樣本準(zhǔn)備(樣本處理區(qū))

用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA,具體操作按照其試劑盒說(shuō)明書操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測(cè)標(biāo)本RNA各5 μl、終體積25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器 上。陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對(duì)照或陽(yáng)性對(duì)照品,終體積為25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器 上。

4. PCR(PCR擴(kuò)增區(qū))

(1)取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管,放置在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,并記錄放置順序。

(2)按下表設(shè)置儀器 核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

操作流程

反應(yīng)體積

25 μL

通道選擇

FAM通道采集病毒熒光信號(hào)

PCR

反應(yīng)

條件

步驟

條件

循環(huán)數(shù)

反轉(zhuǎn)錄

42℃:10分鐘(min)

1

預(yù)變性

95℃:3分鐘(min)

1

預(yù)擴(kuò)增

95℃:5秒(s)

5

55℃:40秒(s)

PCR擴(kuò)增

95℃:5秒(s)

40

55℃:40秒(s)

(此階段結(jié)束時(shí)采集熒光信號(hào))

注:ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時(shí)不選ROX校正,設(shè)置淬滅基團(tuán)選擇None。

適用范圍 【參考值】

1.試劑盒有效性判定:

(1)陽(yáng)性對(duì)照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。

(2)陰性對(duì)照:Ct值>38或無(wú)Ct值,線形為直線或輕微斜線,無(wú)指數(shù)增長(zhǎng)期。


1. 當(dāng)檢測(cè)樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的*檢出*可能會(huì)發(fā)生假陰性的結(jié)果。

2. 被檢樣本在采集、運(yùn)輸、儲(chǔ)存以及處理過(guò)程中操作方式不當(dāng)容易造成RNA降解而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

3. 樣本在采集、運(yùn)輸、儲(chǔ)存以及處理過(guò)程中發(fā)生交叉污染,則容易得到假陽(yáng)性結(jié)果。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 高致病性豬藍(lán)耳病病毒檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)的*檢出限為102 Copies/mL,產(chǎn)品CV值≤5%。

操作流程

1. 整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。

2. 為避免RNA降解,樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。

3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。

4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。

5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。

6. 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。

7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。

8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。

9. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。




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