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產(chǎn)品型號:
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
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更新時間:2022-10-26
簡要描述:
禽流.感病毒H7亞型檢測試劑盒本試劑盒利用實時熒光PCR原理,定性檢測禽流.感病毒H7亞型,對禽流.感病毒引起的流感及其并發(fā)癥的診斷及療效評估有重要指導(dǎo)意義。
禽流.感病毒H7亞型檢測試劑盒
【包裝規(guī)格】 25頭份/盒 & 50頭份/盒
【預(yù)期用途】
禽流.感病毒H7亞型檢測試劑盒
本試劑盒利用實時熒光PCR原理,定性檢測禽.流感病毒H7亞型,對禽.流感病毒引起的流感及其并發(fā)癥的診斷及療效評估有重要指導(dǎo)意義。
【檢驗原理】
本試劑盒針對禽流.感病毒H7亞型基因組高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針,在反應(yīng)體系中含禽.流感病毒H7亞型基因組模板的情況下,PCR反應(yīng)得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應(yīng)通道信號進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析禽.流感病毒H7亞型檢測試劑盒。
注:陰性對照為禽類基因組DNA,陽性對照為失去活性的禽.流感病毒H7亞型cDNA。
【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反復(fù)凍融,有效期12個月。
【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。
【樣本要求】
1.取咽喉拭子、泄殖腔拭子或血液樣本,禽肉取肌肉或內(nèi)臟樣本,樣本處理方法參照相關(guān)文獻資料。
2.樣本采集后應(yīng)立即檢測,若不能立即檢測,應(yīng)置于-80℃冷凍保存,避免反復(fù)凍融,用干冰或液氮運輸。
【檢驗方法】
1. 試劑準(zhǔn)備(試劑準(zhǔn)備區(qū))
(1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。
(2)核算當(dāng)次實驗所需要的反應(yīng)數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計算當(dāng)次實驗所需要的各種試劑量。
n =陰性對照數(shù)(1T)+陽性對照數(shù)(1T)+誤差預(yù)留量(1T)+樣本數(shù)
單反液配制表(每頭份) | RT-PCR反應(yīng)液 | 15.0 μL |
逆轉(zhuǎn)錄酶 | 2.0 μL | |
Taq酶 | 3.0 μL |
(3)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。
2.樣本準(zhǔn)備(樣本處理區(qū))
用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA,具體操作按照其試劑盒說明書操作。
3.加樣
在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測標(biāo)本RNA各5 μl、終體積25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品,終體積為25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。
4.PCR(PCR擴增區(qū))
(1)取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管,放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,并記錄放置順序。
反應(yīng)體積 | 25 μL | 通道選擇 | FA.M通道采集禽.流感病毒H7亞型熒光信號 |
PCR 反應(yīng) 條件 | 步驟 | 條件 | 循環(huán)數(shù) |
反轉(zhuǎn)錄 | 42℃:10分鐘(min) | 1 | |
預(yù)變性 | 95℃:3分鐘(min) | 1 | |
預(yù)擴增 | 95℃:5秒(s) | 5 | |
55℃:40秒(s) | |||
PCR擴增 | 95℃:5秒(s) | 40 | |
55℃:40秒(s) (此階段結(jié)束時采集熒光信號) |
(2)按下表設(shè)置儀器核酸擴增相關(guān)參數(shù)進行PCR擴增。
注:ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時不選ROX校正,設(shè)置淬滅基團選擇None。
【參考值(參考范圍)】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定:
(1)陽性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
(2)可疑:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時應(yīng)對標(biāo)本進行重復(fù)檢測,如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。
(3)陰性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。
【檢驗結(jié)果的解釋】
通道及檢測結(jié)果 | 標(biāo)本檢測結(jié)果解釋 |
FAM | |
+ | 標(biāo)本中檢出禽流.感病毒H7亞型RNA |
- | 標(biāo)本中未檢出禽.流感病毒H7亞型RNA |
【檢驗方法的局限性】
1. 當(dāng)檢測樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的*檢出*可能會發(fā)生假陰性的結(jié)果。
2. 被檢樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中操作方式不當(dāng)容易造成RNA降解而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。
3. 樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中發(fā)生交叉污染,則容易得到假陽性結(jié)果。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 產(chǎn)品的*檢出限為102 Copies/mL,產(chǎn)品CV值≤5%。
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