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禽白血病病毒(ALV)屬反轉錄病毒科,C型腫瘤病毒屬禽白血病/肉瘤病毒群。并分為A、B、C、D和E 5個亞群。A亞群是常見的,而且與淋巴白血病密切相關。B亞群在雞群中偶然也可別離到。但是c和D亞群則十分罕見。E亞群是常見的內源性白血病病毒,它曾經病毒基因方式長久地與宿主細胞DNA結合在一起,簡直與腫瘤構成無關,其致病性也很低。各亞群病毒都具有一起的群特異性(gs)抗原,這種抗原能夠從雞蛋的卵清中、雞體的各種安排中以及體液中檢測到。
此外,從幾個種類的野雞中別離到的禽白血病病毒歸屬于F和G亞群。它們與從雞中別離到的白血病病毒不同。從匈牙利鷓鴣中別離到的內源性病毒歸屬于H亞群,從 Gambel鵪鶉中別離的內源性病毒歸屬于I亞群。許多禽白血病/肉瘤病毒實驗室毒株通常是缺點型的和缺少囊膜基因,它們的繁衍需求依靠它們亞群中的輔佐白血病病毒。
禽白血病病毒(ELISA法)檢測試劑盒
本試劑盒用于禽白血病病毒 P27 抗原的檢測。 本試劑盒是采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗(DAS-ELISA)原理來檢測禽白血病病毒的P27抗原。檢測時,在相應的反應孔中加入陰、陽對照品和待測樣品,經溫育后,若樣品中含有P27抗原,則與酶標板上的抗體結合形成抗原抗體復合物,反之則不能結合。洗滌后,加入的酶標記物與包被板上的抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合。再次洗滌后加入底物,酶催化底物反應呈現藍色,顏色深淺與樣品中P27抗原的含量成正相關,從而達到快速檢測的目的。
操作方法
一:試劑配制
a)0.01 mol/L pH=7.4 PBS 溶液:準確稱取氯化鈉 8.0 g、氯hua鉀 0.2 g、磷酸氫二鈉1.14 g和磷酸二氫鉀0.24 g,加入去離子水溶解并定容至1 L。
b)洗滌工作液:使用前,濃縮的洗滌液應恢復至室溫(20-25℃),并搖動,使沉淀溶解(*在37℃恒溫培養(yǎng)箱中加熱5-10 min),然后用蒸餾水作25 倍稀釋(例如:30 mL 的濃縮洗滌液加上 720 mL 蒸餾水)勻,稀釋好的洗滌液2-8℃可存放7日。
二:樣品處理
蛋清:取全蛋,破碎后,直接取蛋清100μL。 泄殖腔拭子:取棉簽于待檢雞只泄殖腔取樣,然后放入1 mL PBS溶液(0.01mol/L,pH 值 7.4)中,-20℃以下冰箱中凍融一次,待其恢復至室溫后,取 100 μL 進行檢測。 疫苗:疫苗稀釋液將疫苗溶解,再用0.01 mol/L pH=7.4 PBS稀釋10-20倍后,取100μL進行檢測。 胎糞:無需稀釋,可以直接用于檢測,若樣品中含有沉淀或雜質,需在2000-3000 r/min,離心 10 min,取 100 μL 上清進行檢測。
三:操作步驟
取酶標板(根據樣品*,可拆開分次使用),陰性對照、陽性對照和待檢樣品各取100 μL加至相應微孔中,蓋好蓋板膜,輕輕振蕩酶標板10 s,充分混
勻,室溫下(25±2℃)避光反應60 min。
注:陰、陽性對照各設2孔,待檢樣品設1孔。
甩掉孔中的溶液,每孔加入稀釋好的洗滌液300μL,震蕩洗滌4次,每次30s 左右,在干凈吸水紙上拍打去除殘存洗滌液。 每孔加入100μL酶標記物工作液,蓋好蓋板膜,室溫下(25±2℃)避光反應60 min。 棄去孔中的溶液,洗滌4次,方法同2。 底物A液與底物B液按1:1混合均勻,加入孔中,100 μL/孔,蓋上蓋板膜,室溫下(25±2℃)反應15 min。
注:底物工作液也可提前配制,但配制完后需5 min內使用。
每孔加入終止液100μL,5 min內測定結果。
注:若終止液出現絮狀結晶,可37℃加熱,待其溶解后使用。
結果判定
在酶標儀上讀各孔OD650nm值,計算出陰性對照孔OD均值NC和陽性對照孔OD均值PC。
注:NC值<0.200且0.500<PC值≤2.000,試驗結果才有效。否則,應進行重復試驗。
按照公式計算出S/P值:S/P=(SC-NC)/(PC-NC)。
注:SC為被檢樣品孔OD值。
如果S/P<0.17,說明樣品中無禽白血病病毒P27蛋白;如果S/P≥0.17,說明樣品中有禽白血病病毒P27蛋白。
有效期
貯存方法: 2 - 8oC下貯存。
有效期: 12個月。
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